Establishment of an inducing medium for type III effector secretion in Xanthomonas campestris pv. campestris

It is well known that the type III secretion system (T3SS) and type III (T3) effectors are essential for the pathogenicity of most bacterial phytopathogens and that the expression of T3SS and T3 effectors is suppressed in rich media but induced in minimal media and plants. To facilitate in-depth studies on T3SS and T3 effectors, it is crucial to establish a medium for T3 effector expression and secretion. Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) is a model bacterium for studying plant-pathogen interactions. To date no medium for Xcc T3 effector secretion has been defined. Here, we compared four minimal media (MME, MMX, XVM2, and XOM2) which are reported for T3 expression induction in Xanthomonas spp. and found that MME is most efficient for expression and secretion of Xcc T3 effectors. By optimization of carbon and nitrogen sources and pH value based on MME, we established XCM1 medium, which is about 3 times stronger than MME for Xcc T3 effectors secretion. We further optimized the concentration of phosphate, calcium, and magnesium in XCM1 and found that XCM1 with a lower concentration of magnesium (renamed as XCM2) is about 10 times as efficient as XCM1 (meanwhile, about 30 times stronger than MME). Thus, we established an inducing medium XCM2 which is preferred for T3 effector secretion in Xcc.

Produccion de xantano por Xanthomonas campestris en un medio de cultivo no convencional / Xanthan production by Xanthomonas campestris in no-conventional culture medium

Se determinó que X. campestris vp. Ocumo, exhibió mayor capacidad para crecer y producir xantano que las otras dos variedades de X. campestris analizadas. Utiliza una amplia diversidad de fuentes de carbohidratos. Sin embargo, la cepa no produce el exopolisacárido cuando la fuente de carbohidrato proviente de materiales ricos en lignocelulosa. El Jarabe Glucosado FAVEPRO (JGF) fue la fuente de carbono con la que se logró el mayor rendimiento de xantano (23g/l) con la mayor viscosidad (7000 cps). Las condiciones óptimas de producción determinadas en fiolas de 1 L (volumen de trabajo 10 L) fueron las siguientes: 5 por ciento de azúcares totales, 0,05 por ciento de urea como fuente de nitrógeno, 0.5 por ciento de fosfato dipotásico, pH 7.5, 10 por ciento de inóculo, temperatura 30 grados Celsius, agitación entre 250-1000 rpm y aireación entre 0.3-1.0 vvm. X. campestris vp. Ocumo, fue también capaz de producir xantano (10g/l), y aumentar la viscosidad (hasta 1500 cps) de un medio basado en el extracto ácido soluble de corteza de yuca molida (EACY).

Evaluación de medios de cultivo para detectar la reacción de hidrólisis del almidón por patovares de Xanthomonas campestris / Evaluation of culture media for detecting the starch hydrolysis reaction in pathovars of Xanthomonas campestris

Se emplearon 60 cepas de diferentes patovares de Xanthomonas campestris para evaluar la reacción de hidrólisis del almidón y compuestos intermedios de degradación del mismo en diferentes medios de cultivo: almidón solubre, almidón de papa, almidón insolubre de maíz, amilopectina de papa, amilopectina de maíz y amilosa de papa. El 74% de las cepas presentó reacción positiva en los 6 medios. De las restantes, los patovares holcicola, pelargonii, pruni y vitians dieron reacción negativa y, las cepas de X. campestris pv. vesicolatoria mostraron resultados variables. Los medios que contienen almidones insolubles de papa y de maíz manifestaron mayores ventajas para determinar la reacción de hidrólisis no solamente por la claridad y tamaño de los halos formados sino también por su utilidad para aislamientos directos. La reacción de hidrólisis del almidón serviría como un carácter complementario para diferenciar especies de Xanthomonas, pero no sería válida para separar a los patovares del grupo de X. campestris debido a la variación suficiente que existe entre ellos pese al alto porcentaje de reacciones positivas detectadas